Quantificação de antígenos HLA classe I solúveis pela técnica de ELISA / Quantification of soluble HLA class I antigens by ELISA assay

As moléculas HLA (Human Leucocyte Antigens) são consideradas, principalmente, estruturas de superfície celular envolvidas em uma variedade de reações imunes associadas com transplante, infecções e doenças autoimunes. Os antígenos HLA também podem ser encontrados, em forma solúvel, no soro e em diferentes fluidos do organismo humano. Este trabalho teve como objetivo desenvolver a técnica imunoenzimática (ELISA) para quantificar os níveis séricos de antígenos HLA classe I, específicos e totais, em indivíduos normais e em pacientes renais. A técnica de ELISA foidesenvolvida para demonstrar a presença, no soro, de antígenos HLA classe I totais (sHLAI) e as especificidades HLA-A2 (sHLA-A2) e HLA-B7 (sHLA-B7). Oitenta e oito amostras de soro foram envolvidas neste estudo, sendo 61 amostras provenientes de indivíduos sadioscadastrados no Hemocentro Regional de Maringá, Estado do Paraná, e 27 pacientes renais, provenientes dos centros de diálise da cidade de Maringá, Estado do Paraná. As concentrações médias de sHLA para as especificidades -A2 e -B7, detectadas somente emindivíduos sadios, foram 504.06 ng mL-1 ± 142.10 e 427.33 ng mL-1 ± 140.73,respectivamente. Resultados preliminares mostraram que sHLA-I, em indivíduos sadios, foi de 253,77 ng mL-1 e, em indivíduos renais em diálise, de 381,67 ng mL-1. A técnica de ELISA para detecção de antígenos HLA solúveis poderá ser útil em estudos comparativos, em diferentes populações saudáveis, diferentes patologias e no monitoramento das rejeiçõe sem transplantes.

HLA (Human Leucocyte Antigens) molecules are regarded mainly as cell surface structures involved in several immune reactions associated with transplants, infections and auto-immunediseases. HLA antigens can be also found in soluble form in serum and in different fluids of the human body. The aim of this work was to develop the immunoenzymatic assay (ELISA) to quantify serum levels of specific and total soluble HLA class I antigens innormal individuals and in kidney patients. ELISA assay was developed to demonstrate the presence, in serum, of HLA-A2 (sHLA-A2), HLA-B7 (sHLA-B7) and total class I (sHLA-I) antigens. Eighty-eight serum samples were involved in this study, 61 from healthy individuals registered in the Regional Blood Center of the city of Maringá, Paraná State, and 27 kidney patients from dialysis centers of Maringá. The mean concentrations of sHLA-A2 and sHLA-B7, in healthy individuals, were respectively, 504.06 ng mL-1 ± 142.10and 427.33 ng mL-1 ± 140.73. Preliminary results showed that sHLA-I in healthy individuals was 253.77 ng mL-1, and 381.67 ng mL-1 in kidney dialysis patients. The ELISA assay couldbe useful to detect soluble HLA antigens in comparative studies in different healthy populations, in several pathologies and in monitoring rejection in transplantation.

Fertilidade após a inseminação artificial intra-cervical ou laparoscópica intra-uterina de ovelhas utilizando diluidores à base de água de coco / Fertility following intracervical or intrauterine laparoscopic insemination of ewes using extenders based on coconut water

O objetivo deste estudo foi avaliar a taxa de prenhez em ovelhas utilizando diluidores à base de água de coco (in natura: ACN ou em pó: ACP-102®) após inseminação artificial intra-cervical (Experimento 1) ou laparoscópica intra-uterina (Experimento 2). Experimento 1. Sêmen de 4 carneiros Santa Inês foi coletado, diluído a 37°C (T1: ACN; T2: ACP-102®) e resfriado á 4°C. 56 ovelhas Santa Inês foram inseminadas cervicalmente após a sincronização, 31 utilizando o diluidor ACN e 25 o diluidor ACP-102®. Experimento 2. Sêmen de 5 carneiros adultos (Santa Inês: n=04; Dorper n=01) foi coletado e processado de acordo com o descrito. 64 ovelhas SRD foram inseminadas intra-uterina por laparoscopia após a sincronização do estro, 37 utilizando o diluidor ACN e 27 o diluidor ACP-102®. O diagnóstico de gestação foi realizado por ultra-sonografia. A taxa de prenhez entre os tratamentos, dentro de cada método de inseminação, entre cada diluidor para ambos métodos de inseminação foi analisada pelo teste do Qui-quadrado (p<0,05). A taxa de prenhez após IA intra-cervical (ACN: 25,8% vs. ACP-102®: 48%) e laparoscópica (ACN: 72,9% vs ACP-102®: 70,3%) não foi influenciada pelos diluidores. A taxa de prenhez foi influenciada pelo método de inseminação (intra-cervical: 35,7% vs.laparoscopia: 71,8%; p<0,05). Os diluidores a base de água de coco podem ser utilizados nas inseminações artificiais cervical ou laparoscopica em ovelhas do Nordeste do Brasil em condições de campo.

The objetive of this study was to evaluate pregnancy rates in ewes using extenders based on coconut water (in natura: NCW or in powder: PCW-102®) following intra - cervical (Trial 1) or intrauterine laparoscopic insemination (Trial2). Trial 1. Semen from 4 Santa Inês rams were collected, diluted at 32°C (T1: NCW; T2: PCW-102®) and cooled to 4°C. 56 adult Santa Inês ewes were inseminated intra-cervically following syncronization, 31 using the extender NCW and 25 the extender PCW-102®. Trial 2. Semen from 5 rams (Santa Inês: n=04; Dorper n=01) were collected and processed as described. 64 adult crossbred multiparous ewes were inseminated intrauterine by laparoscopy following oestrus syncronization. 37 ewes using the extender NCW and 27 the extender PCW-102®. The pregnancy diagnosis was performed by ultrasonography. The fertility rates between treatments for each method of insemination and within each extender for both methods were analysed by Chi-square test (p<0,05). The pregnancy rates following intra-cervical (NCW: 25.8% vs PCW-102®: 48%) and intrauterine (NCW: 72.9% vs 70.3%) inseminations were not influenced by the extenders. The pregnancy rate was influenced by insemination method (intra-cervical: 35.7% vs laparoscopy: 71.8%; p<0,05). The extenders based coconut water as basis can be used following cervical or intra-uterine laparoscopic inseminations in ewes from Northeast of Brazil under field conditions.